广东快乐十分钟出租:蛋白非標記定量分析

广东快乐十分4个号 www.wfsmjl.com.cn 蛋白非標記定量分析是指不需要穩定同位素標記樣本,每個樣本分別上機檢測。由于不需要對樣本進行標記,蛋白非標記定量分析技術成本較低,并且對一次檢測的樣本量無限制,可同時比較多個樣本的蛋白質表達差異。

根據質譜數據采集模式的不同,蛋白非標記定量又分為利用數據依賴采集模式(DDA)的label free方法(LFQ),和利用數據非依賴采集模式(DIA)的DIA方法。蛋白定量DIA技術將質譜整個全掃描范圍分為若干個窗口,高速、循環地對每個窗口中的所有離子進行選擇、碎裂、檢測,因此可以無遺漏地獲得樣本中所有離子的全部碎片信息,數據利用度大大提高,缺失值更少。因此重復性大幅提升,定量準確性更高。蛋白定量DIA技術被Nature Methods雜志評為2015年最值得關注的技術,近年來受到了越來越多的關注。

應用領域
不同處理、不同生理/病理狀態下樣本中的蛋白質表達變化
蛋白DIA定量技術特別適合大樣本量的蛋白質研究

技術路線

                          

分析內容
1. 標準信息分析
1.1 質譜準確度評估
1.2 參考蛋白數據庫建立(DIA)
1.3 蛋白數據庫建立與Mascot軟件搜索(LFQ)
1.4 蛋白質鑒定
1.5 蛋白質功能注釋(GO功能、KEGG代謝通路、COG/KOG)
1.6 蛋白質定量
1.7 差異蛋白分析
1.8 差異蛋白GO/KEGG功能富集分析
1.9 多樣品間表達模式聚類分析(三個或三個以上樣品可提供)

2. 定制化信息分析
2.1 蛋白質組與轉錄組關聯分析
2.2 蛋白互作網絡分析

樣本要求
1. 新鮮動物組織:≥200mg
2. 新鮮植物組織:≥2g
3. 新鮮培養細胞:≥5*106個細胞每管,3管
4. 真菌、細菌:≥200mg
5. 血清、血漿:150μl * 4管
6. 體液樣本:尿液:5ml *4管(送樣前需1000g離心5min,棄去沉淀),其他體液(唾液、羊水、細胞培養上清液等)要求5ml以上。
7. 蛋白溶液:蛋白總量500μg以上

項目周期
標準流程的運轉周期約為55個工作日。

參考文獻
Hu A, Noble W S, Wolfyadlin A, et al. Technical advances in proteomics: new developments in data-independent acquisition.[J]. F1000Research, 2016.
Sajic T, Liu Y, Aebersold R, et al. Using data-independent, high-resolution mass spectrometry in protein biomarker research: Perspectives and clinical applications[J]. Proteomics Clinical Applications, 2015: 307-321.
Musa Y R, Boller S, Puchalska M, et al. Comprehensive Proteomic Investigation of Ebf1 Heterozygosity in Pro-B Lymphocytes Utilizing Data Independent Acquisition.[J]. Journal of Proteome Research, 2018, 17(1):76.